به کارگیری یک روش حساسrt-nested pcr برای تشخیص ویروس هپاتیت c

هدف: ویروس هپاتیت cیکی از مهمترین عوامل ایجاد کننده هپاتیت ویروسی به شمار می رود و تشخیص آن در نمونه های مشکوک از اهمیت بالایی برخوردار است. خطر انتقال عفونت ویروسی از طریق تزریق خون و فرآورده های آن ناشی از نقص روش های غربالگری سرولوژیک در تشخیص اهداکنندگان آلوده ای است که در دوره پنجره بیماری هستند. بنابراین تشخیص دقیق و به موقع عفونت hcvپیش از ظهور آنتی بادی در بدن فرد آلوده از اهمیت ویژه ای برخوردار است. تشخیص ژنوم ویروس hcv در نمونه های مشکوک، از گسترش بیماری و شیوع روزافزون آن جلوگیری خواهد نمود. با استفاده از این روش که مبتنی بر شناسایی اسید نوکلئیک ویروس است، می توان عفونت را در مراحل ابتدایی و قبل از ظهور آنتی بادی های اختصاصی تشخیص داد. هدف از این پژوهش طراحی روش بسیار حساس و دقیق rt-nested pcr برای تشخیص عفونت hcv است. مواد و روش ها: روش rt-nested pcr به منظور جداسازی توالی حفاظت شده از ناحیه 5' utr راه اندازی و به کار برده شد. ابتدا با استفاده از روش ترانس کریپتاز معکوس، سنتز cdna از روی rnaژنوم ویروس صورت گرفت. پس از آن با روش nested pcr با استفاده دو جفت آغازگر اختصاصی و طی دو مرحله، قطعه مورد نظر تکثیر شد. محـصولات pcr به کـمک روش الـکتروفورز بررسی و همچنین از کیت تجاری rt-pcr یک مرحله ای برای مقایسه با نتایج حاصل از روش طراحی شده استفاده شد. نتایج: تعداد 25 نمونه پلاسمای بیماران hcv مثبت که توسط روش های الایزا و وسترن بلات مثبت قطعی تشخیص داده شده بودند به عنوان نمونه های مثبت، رقت های مختلف از یک نمونه بیمار با تیتر بالا به عنوان استاندارد و 25 نمونه پلاسمای منفی متعلق به اهداکنندگان خون سالم به عنوان کنترل منفی جمع آوری شده با این روش بررسی شد. در تمام موارد مثبت، باند مورد نظر روی ژل آگارز مشاهده شد. با توجه به این که در هیچ یک از نمونه های منفی باند مزبور ملاحظه نشد، مقایسه نتایج حاصل از روش طراحی شده با روش تجاری موجود همبستگی خوبی را نشان داد. نتیجه گیری: بر اساس نتایج به دست آمده در این مطالعه، مشخص شد که روش راه اندازی شده در تشخیص عفونت hcv از حساسیت و اختصاصیت بالایی برخوردار است. همچنین با توجه به حساسیت این روش، به نظر می رسد که می توان ژنوم ویروس را پیش از تغییرات سرمی و ظهور آنتی بادی ها تشخیص داد و از این رو می توان دوره پنجره را کوتاه تر نمود.